VDRL - USR

ANTÍGENO DE CARDIOLIPINA PARA INVESTIGAR REAGINAS DE SÍFILIS EN SUERO SIN INACTIVAR, EN PLASMA Y L.C.R. (NO REQUIERE RECONSTITUCIÓN)

AGENTE DE DIAGNOSTICO

INTRODUCCIÓN

La sífilis es una enfermedad generalizada, producida por treponema pallidum, transmitida habitualmente por contacto sexual.

El diagnostico descansa en la serologia; los métodos determinan dos clases de anticuerpos. 1) Tipo "CARDIOLIPINA" no treponema e inespecificos y 2) Los antitreponemas especificados. La facilidad para su determinación a hecho que los del tipo CARDIOLIPINA se utilicen universalmente en las exploraciones iniciales ya sean exámenes individuales o encuestas de población; la variante técnica mas comúnmente empleada es la VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) que determina la floculacion en placa (cuantitativa) del antígeno con CARDIOLIPINA y lecitina.

REACTIVOS Y MATERIA PROPORCIONADO

* Antígeno en suspencion estabilizado (VDRL).

*Control positivo.

*Control negativo.

*Aguja No. 21 sin bisel.

*Pipetas desechables.

ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO

El antígeno de VDRL y los Sueros Controles son estables hasta su fecha de caducidad indicada en la etiqueta cuando se almacenan  de 275 - 281 K (2 - 8 °C). No congelar.

MATERIAL Y EQUIPO NECESARIO

*Placa cóncava 

*Agitador Mecánico.

*Cronometro.

*Microscopio.

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA.

- Obtener 3.0 ml de sangre por venopuncion.

-Centrifugar y separar el suero.

MÉTODO

1.-En una anillo de una placa cóncava depositar 0.05 ml de suero problema.

2.-En anillos diferentes colocar una gota de gota control positivo y en otra por separado una gota de control negativo, extender sobre la superficie del anillo.

3.- Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado previamente  resuspendido, en cada una de las muestras utilizando la aguja No. 21 sin bisel.

4.- Colocar la placa sobre el agitador mecánico a 180 r.p.m. DURANTE 4 MINUTOS. Las pruebas realizadas en climas extremadamente secos pueden provocar la evaporación de las muestras, por lo tanto, la placa en rotación puede ser cubierta por una tapa de caja petri húmeda previamente con una gasa. 

5.- Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10 X.

-Interpretación

*CONTROL POSITIVO: 

Presencia de floculacion mediana o grande.

*CONTROL NEGATIVO

Ausencia de floculacion.

NOTA:

-- Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.

--Sueros débiles positivos y con fuertes evidencias clínicas  de la enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de prozona.

-- Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 minutos puede secarse la reacción y causar dificultad en la interpretación.

-- El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de utilizarse.

RESULTADO:
El resultado fue NEGATIVO porque no existia presencia de sifilis en el suero del paciente.

Rosa de Bengala :P

Rosa de Bengala (Antigeno Brucelar Amortiguado) Para diagnostico de Brucelosis.

Prueba de aglutinación rápida en Placa para la detección temprana de aglutininas especificas de Brucella (Brucella Melitensis, Abortus y Suis).

PRINCIPIOS
-Se utiliza un antígeno de Brucella Abortus biotipo.
1(cepa 99S o cepa 1119-3)) acidificado regulado y teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la detección de aglutininas especificas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para un diagnostico temprano.
REACTIVOS:
Antígeno Rosa de Bengala.
Control Positivo de Brucella.
Control Negativo de Brucella.

--se utiliza Únicamente diagnostico invitro--

Almacenamiento y estabilidad de los reactivos.
 El reactivo y los controles son estables de 275.281 K (2-8 °C) hasta sus respectivas fechas de caducidad.

MATERIAL:
-- Placa de prueba (Se recomienda que siempre se utilice  una placa de vidrio para una mejor observación de los resultados).
-- Pipetas desechables.
-- El gotero incluido proporciona una gota de 30-40 ul.
* Se recomienda utiliza pipetas automáticas preferentemente.
RECOLECCIÓN DE MUESTRA Y PREPARACIÓN:
- ES recomendable que solo utilice suero.
- Evite la hemolisis o lipemia de las muestras ya que esto puede interferir con los resultados.
Conservar muestras de 275.288 K (2-8 °C) si no se va a hacer el estudio en el momento.

PROCEDIMIENTO:
1.- llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.
2.- Utilizando la pipeta automática adicione 30 ul de la muestra de el paciente en un circulo de la placa.
3.- Mezcle suavemente el antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo, después coloque 30 ul en la placa de prueba, en el mismo circulo donde se coloco la muestra de el paciente, mezcle ambas con un aplicador (diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles.
4.- Agitar la placa con movimietos rotatorios por 4 minutos.
5.- con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado.

IMPORTANTE:  DESPUÉS DE ESTE TIEMPO LA LECTURA YA NO ES VALIDA.
RESULTADOS:

-- La lectura debe llevarse acabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se empezó a mezclar. Este es un tiempo optimo en el que se da un espacio para la observación de ciertas aglutininas que revelan lentamente y de otra manera se puede  omitir, ademas de que se puede presentar reacciones no especificas.
*No aglutinación - Suero Negativo.
*Cualquier cantidad de Aglutinación
presencia de anticuerpos específicos .
Suero Positivo.
* Esta solo es un prueba cualitativa de sceening. La cual si resulta positiva debe ser confirmada mediante otra prueba cuantitativa para brucelosis, como: Aglutinación Lenta Estándar o aglutinación lenta en presencia de 2-Mercaptoetanol.
NOTA: El aislamiento del agente etiologico mediante hemocultivos es de suma importancia.

PRACTICA NO. 3 .... - HEMATOCRITO -

INTRODUCCIÓN

El hematocrito es el volumen que ocupan los eritrocitos en una muestra sanguinea y se expresa en porcentaje.
La determinacion de hematocrito es un metodo sencillo y confiable para detectar anemia o policitemia.
El hematocrito se puede detectar mediante dos metodos:

1.-  MACROMETODO (WINTROBE)
2.- MICROMETODO

MATERIAL Y REACTIVOS
Tubo de wintrobe         Sangre venosa
Tubo capilar
Plastilina
Centrifuga
Microcentrifuga
Pipeta pasteur de tallo largo
Equipo para venopuncion
Lector para hematocrito o regla

TECNICA (MACROMETODO)

1.- Mezclar la muestra sanguinea suavemente y con una pipeta pasteur o canula llenar el tubo de wintrobe, colocando la punta de la pipeta hasta el fondo de el tubo, la punta de la pipeta se va elevando pero permaneciendo por debajo del menisco de sangre para evitar la formacion de burbujas o espma.
2.- El tubo se llena hasta la marca 100 con la muestra sanguinea y se pone a centrifugar durante 30 minutos a 3,000 r.p.m.
3.- Se efectua la lectura.

TÉCNICA (MICROMETODO)

1.- Mezclar la muestra sanguínea adecuadamente y llenar un tubo capilar hasta 3/4 partes.
2.- El extremo vació que no estuvo en contacto con la sangre se sella con plastilina o calor.
3.- El tubo con la muestra sanginea se coloca en la microcentrifuga a 10,000 r.p.m. durante 10 minutos.
4.- Leer el porcentaje de hematocrito en el lector o medirlo con la regla.